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常見培養基的操作方法和注意事項

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 加水

 打開滅菌鍋蓋,向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水,以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠,防止滅菌過程中干鍋。裝料、加蓋滅菌材料放好后,關閉滅菌器蓋,采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。 



排氣

打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當有大量蒸汽排出時,維持5min,使鍋內冷空氣完全排凈。 



升壓、保壓和降壓

當鍋內冷空氣排凈時,即可關閉排氣閥,壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時,控制電壓以維持恒溫,并開始計算滅菌時間,待時間達到要求(一般培養基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時,打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣,否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。 

 

 

滅菌后的培養基空白培養

滅菌后的培養基放于37℃培養箱中培養,經24h培養無菌生長,可保存備用;斜面培養基取出后,立即擺成斜面后空白培養;半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養。 

 

 

干熱滅菌法

通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后,放入電烘箱中烘烤,即加熱至160-170℃維持1-2h 
干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品,液體及固體培養基等都不能用此法滅菌。

 

 

滅菌前的準備

玻璃器皿等在滅菌前必須經正確包裹和加塞,以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內;三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙,用棉繩以活結扎緊,以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心,輕輕捅入管口,松緊必須適中,管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去,滅菌時將吸管裝入金屬管筒內進行滅菌,也可用紙條斜著從吸管尖端包起,逐步向上卷,頭端的紙卷捏扁并擰幾下,再將包好的吸管集中滅菌。 

 

 

干燥箱滅菌

將包扎好的物品放入干燥烘箱內,注意不要擺放太密,以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160-170℃并恒溫1-2h,注意勿使溫度過高,超過170℃,器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿,溫度為120℃持續30分鐘即可。溫度降至60-70℃時方可打開箱門,取出物品,否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。 
用此法滅菌時,絕不能用油、蠟紙包扎物品。 



火焰滅菌

直接用火焰灼燒滅菌,迅速徹底。對于接種環,接種針或其它金屬用具,可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外,在接種過程中,試管或三角瓶口,也采用通過火焰而達到滅菌的目的。

 

 

結果

記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件(溫度、壓力等)。 
  試述高壓蒸汽滅菌的過程及注意事項。

 

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